原則葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。植物細(xì)胞死亡時，葉綠素是游離的，游離的葉綠素很不穩(wěn)定，對光熱敏感；在酸性條件下，葉綠素產(chǎn)生綠褐色的脫鎂葉綠素，脫鎂葉綠素在稀酸堿液中水解成亮綠色的葉綠素以及葉綠醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種：葉綠素a和b，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
葉綠素含量的測定方法很多，主要有：
1、原子吸收光譜法：通過測定鎂的含量，進而間接計算出葉綠素的含量。
2、分光光度法：用分光光度計測定葉綠素提取物在最大吸收波長處的吸光度值，利用朗伯-比爾定律計算提取物中各色素的含量。
葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，兩條吸收曲線在652nm處相交。因此，測定提取物在645nm、663nm、652nm波長處的吸光度，根據(jù)經(jīng)驗公式分別計算出葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素的含量。
材料和儀器
植物材料96%乙醇丙酮石英砂碳酸鈣粉分光光度計電子頂載天平砂漿棕色容量瓶定量濾紙吸水紙擦拭紙滴管漏斗
步驟
1、取新鮮植物葉子（或其他綠色組織）或干燥材料，擦去組織表面的污垢，去除中脈，切塊。稱取剛切碎的樣品2g，放入研缽中，加入少量石英砂、碳酸鈣粉和3mL95%乙醇，研磨成均質(zhì)漿液，加入10mL乙醇，繼續(xù)研磨直到組織變白。靜置 3-5 分鐘。
2、取一張濾紙置于漏斗中，用乙醇潤濕，將提取物沿玻璃棒倒入漏斗中，濾液流入100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽和研杵及殘渣數(shù)次，最后連同殘渣一起倒入漏斗中。
3、用滴管吸乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙上沒有綠色和殘留物為止。最后，用乙醇稀釋至100mL，搖勻。
4、取葉綠體色素提取物分別在665nm、645nm和652nm波長處測定吸光度，以95%乙醇為空白對照。
防范措施
1、光照對葉綠素有破壞作用。實驗應(yīng)在弱光下進行，研磨時間盡量短。
2、如果色素提取液中混有其他物質(zhì)引起混濁，會影響吸光度的測定，應(yīng)重新過濾或離心。
3、測量色素的吸光度前，應(yīng)根據(jù)儀器說明書和標(biāo)準(zhǔn)葉綠素a、b校準(zhǔn)分光光度計的波長，否則會影響葉綠素含量的測量精度。
常見問題
1、無水乙醇提取時間較長，對某些物質(zhì)尤其是木本植物的葉綠素提取不夠完全。無水丙酮萃取會出現(xiàn)渾濁，影響比色測定。因此，提取葉綠素最好選擇丙酮和無水乙醇，比例為2：1效果更佳。
2、傳統(tǒng)的80%丙酮法由于含水量高，提取速度慢，測定值低，葉綠素穩(wěn)定性差，應(yīng)慎用。原則葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。植物細(xì)胞死亡時，葉綠素是游離的，游離的葉綠素很不穩(wěn)定，對光熱敏感；在酸性條件下，葉綠素產(chǎn)生綠褐色的脫鎂葉綠素，脫鎂葉綠素在稀酸堿液中水解成亮綠色的葉綠素以及葉綠醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種：葉綠素a和b，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。